人表皮角质形成细胞

一． 产品简介

1、产品名称：人表皮角质形成细胞   

2、组织来源：皮肤组织

3、产品规格：25cm²培养瓶/5×10⁵cells

4、细胞简介：

人表皮角质形成细胞分离自皮肤组织；表皮角质形成细胞主要分布于表皮基底层，在上皮程序性死亡后，细胞产生角化并移向表皮。体外培养的人表皮角化细胞容易导致终末分化，不能充分增殖。角质形成细胞最终产生角质蛋白，在其向角质细胞演变过程中，一般可以分为四层，即基底层、棘层、颗粒层以及角质层。表皮角质形成细胞在创伤愈合中起至关重要的作用，尤其是严重烧伤患者表皮角质形成细胞的匮乏与患者病程长短、并发症的发生及后期瘢痕的形成均有密切关系，因此应用组织工程技术在体外进行表皮角质形成细胞的分离、培养与保存并应用于临床始终都是烧伤工作者的一个研究热点。   

本公司生产的人表皮角质形成细胞采用胰蛋白酶法制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells，细胞经PCK免疫荧光鉴定，细胞纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

5、培养基信息：

培养基内容：基础培养基、FBS、Penicillin、Streptomycin等

为保证细胞体外培养最佳状态我们推荐使用人表皮角质形成细胞专用培养基作为体外培养人表皮角质形成细胞专用培养基。

二.细胞发货及鉴定图片

（1）细胞状态照片：细胞发货时发送至少3张细胞发货前白光电子照片；

（2）细胞鉴定照片：提供一套细胞鉴定图片（可用于发文章）；若要用于文章多套使用，需额外增加鉴定费用，提供3套鉴定图片；

三.使用方法

在技术部标准操作流程下，人表皮角质形成细胞可传3-5代左右；建议您收到细胞后尽快进行相关实验。

一、客户收到细胞操作如下

1. 取出25cm²培养瓶，75%酒精消毒，拆下封口膜，放入37℃，5%CO2细胞培养箱中静置3-4h，以稳定细胞状态；

2. 观察细胞生长情况，细胞密度低于80%时，贴壁细胞倒去瓶中培养液，留下8ml作用继续培养；细胞密度大于80%时，即可进行传代；

3. 吸出25cm²培养瓶中的培养基，用PBS洗涤3次；

4. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，37℃温浴2-3min左右；倒置显微镜下观察细胞回缩变圆，透亮时即可终止消化，加入双倍完全培养液轻轻吹打细胞使其变成单细胞悬液；

5. 收集细胞悬液至离心管内，1000rpm离心5min，观察细胞沉淀；

6. 加入1ml的完全培养液，轻轻吹打成单细胞悬液，均匀分配至细胞培养瓶中，初次传代建议按照1：2比例进行

7. 待细胞完全贴壁后，培养观察。之后每隔2-3天更换新鲜的完全培养基。

二、细胞冻存管复苏

1. 提前室温预热培养基，将水浴锅调至37℃；

2. 在超净工作台内提前准备好15ml离心管，并加入5ml的完全培养基；

3. 将冻存管快速放入水浴锅中，不断晃动冻存管，直至管内冰块全部融化

4. 然后快速取出，喷洒酒精，转移至超净工作台；

5. 拧开冻存管螺纹盖，用移液枪将细胞悬液轻轻吸出，转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000rpm离心5min；

6. 离心结束后，观察有无细胞沉淀，将上清弃去，加入1ml新鲜的完全培养基，用移液枪轻轻吹打成细胞悬液；将细胞悬液转移至T25培养瓶中，T25培养瓶建议培养基加入量5-7ml，轻轻晃动培养瓶使细胞分散均匀，置于培养箱中培养。

三、细胞冻存

1. 冻存条件：55% 基础培养基+40%FBS+5%DMSO或者无血清冻存液

2. 保存条件：液氮存储

四、注意事项

1. 培养基于4℃条件下可保存3-6个月；

2. 细胞收到操作注意事项，请参考《细胞操作指导》

3. 细胞售后政策，请参考《原代细胞售后告知书》

由于使用所用试剂、操作环境、操作手法不同，以上仅供各实验室参考！